Veli1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406559

Visão geral

LIN7A codifica a Veli1, uma proteína de andaime contendo domínio PDZ que ajuda a organizar domínios de membrana polarizados ao acoplar receptores transmembrana e canais iônicos ao citoesqueleto e à maquinaria de tráfego intracelular. Veli1 participa do complexo de polaridade Crumbs e de processos relacionados de direcionamento basolateral, influenciando a polaridade epitelial, a integridade das junções e a localização de receptores. Por meio de interações com proteínas MAGUK e outros ligantes de PDZ, LIN7A contribui para a organização da sinalização na membrana plasmática e em compartimentos sinápticos. A polaridade celular alterada e complexos de sinalização mal localizados são amplamente relevantes para mecanismos estudados em contextos de neurodesenvolvimento e associados ao câncer, tornando LIN7A um alvo útil para a dissecação de vias.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Veli1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene LIN7A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do LIN7A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do LIN7A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Veli1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de LIN7A para a investigação da sinalização de Veli1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) LIN7A críticos para a função Veli1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos LIN7A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Veli1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Veli1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus LIN7A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Veli1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Veli1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia LIN7A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo LIN7A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.