VEGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423665

概要

Vegfa は血管内皮増殖因子（VEGF）をコードしており、VEGF は分泌性サイトカインとして、胚発生期の血管形成（vasculogenesis）および出生後の血管新生（angiogenesis）において、内皮細胞の増殖・遊走・生存を促進します。VEGF シグナルは主に VEGFR2 を介して PI3K–AKT、MAPK/ERK、PLCγ–PKC、および一酸化窒素（NO）経路を活性化し、HIF 依存的な制御による低酸素応答の一環として、血管透過性や組織灌流を協調的に調節します。マウスモデルでは、Vegfa の発現量（用量）の変化が血管パターニング、創傷治癒、炎症に伴う組織リモデリングに影響します。VEGF シグナルの破綻は、治療効果を示唆するものではなく、腫瘍関連血管新生、網膜新生血管形成、虚血に関連する血管適応などの文脈で広く研究されています。

VEGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVegfa遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vegfa内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vegfaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VEGFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VEGFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vegfa欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VEGFの機能に不可欠なVegfaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vegfaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VEGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVEGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vegfa遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VEGF HDRプラスミド（m）および VEGF HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVegfaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVegfa標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。