VEGF Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423665-ACT

O gene Vegfa de camundongo codifica o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), uma citocina secretada que regula a proliferação, a migração e a sobrevivência das células endoteliais para coordenar a angiogênese e a permeabilidade vascular. A sinalização do VEGF envolve principalmente o VEGFR2 para ativar as cascatas PI3K–AKT, MAPK/ERK e PLCγ–PKC, integrando sinais de hipóxia e do metabolismo ao remodelamento tecidual. A expressão desregulada de VEGF está associada à neovascularização patológica, à perfusão alterada e a mudanças no microambiente inflamatório que influenciam a biologia tumoral, o reparo de feridas e modelos de doenças retinianas e cardiovasculares. Como um nó central na comunicação cruzada entre vasos e estroma, Vegfa é amplamente utilizado para investigar a sinalização entre endotélio e parênquima e o remodelamento da matriz extracelular.

VEGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Vegfa sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VEGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Vegfa em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Vegfa, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VEGF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Vegfa nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VEGF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VEGF em células tumorais com expressão de Vegfa silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.