vanin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406512
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- vanin-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico vanin-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: vanin-1 Anticuerpo (3-RE8): sc-135599
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
vanin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406512 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
VNN1 codifica vanina-1, una ectoenzima anclada a GPI con actividad panteteinasa que hidroliza la panteteína para generar cisteamina y pantotenato, conectando el metabolismo de la coenzima A con el control del estado redox. Al modular el equilibrio cisteamina/cistamina y sus efectos posteriores sobre la homeostasis del glutatión, vanina-1 influye en las respuestas celulares al estrés oxidativo, la inflamación y el daño tisular. La expresión de VNN1 es destacada en contextos epiteliales y relacionados con el sistema inmunitario, donde puede moldear el reclutamiento de leucocitos y la señalización inflamatoria asociada a barreras. La actividad desregulada de VNN1/vanina-1 se ha asociado con estados de enfermedad inflamatorios y metabólicos, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar vías sensibles al estrés.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO vanin-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VNN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VNN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VNN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína vanin-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VNN1 para la investigación de la señalización de vanin-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de VNN1 críticos para la función de vanin-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VNN1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido vanin-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido vanin-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VNN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR vanin-1 (h) y el plásmido HDR vanin-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VNN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VNN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.