UVSSA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408933

Visão geral

A UVSSA (proteína de andaime estimulada por UV A) é um fator-chave no reparo por excisão de nucleotídeos acoplado à transcrição (TC-NER), no qual ajuda a restaurar a transcrição após a RNA polimerase II ficar bloqueada em lesões de DNA induzidas por UV. A proteína humana UVSSA coopera com CSA/ERCC8 e CSB/ERCC6 e promove o recrutamento e a estabilização da desubiquitinase USP7, sustentando uma dinâmica regulada de ubiquitinação durante a montagem do complexo de reparo. Por meio dessas atividades, a UVSSA contribui para a integridade do genoma, a recuperação da transcrição após estresse genotóxico e as respostas celulares à irradiação UV. Defeitos no TC-NER mediado por UVSSA estão associados à sensibilidade à UV e a distúrbios dentro do espectro da síndrome de Cockayne, tornando-a relevante para o estudo de disfunções em vias de reparo do DNA e de falhas transcricionais induzidas por estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO UVSSA (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene UVSSA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do UVSSA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do UVSSA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína UVSSA.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de UVSSA para a investigação da sinalização de UVSSA, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) UVSSA críticos para a função UVSSA
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos UVSSA para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo UVSSA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo UVSSA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus UVSSA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo UVSSA Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR UVSSA (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia UVSSA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo UVSSA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.