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UTYCRISPR激活质粒(h) | sc-416327-ACT | 20 µg | $397.00 |
UTY(泛在转录的四螺旋重复基因,Y 连锁)编码 KDM6 家族的一种核内、与染色质相关的蛋白,参与对转录程序的表观遗传调控。尽管与其旁系同源基因相比,UTY 的催化去甲基化酶活性较弱,但其仍被认为与组蛋白 H3K27 甲基化状态的调节、染色质重塑以及发育相关基因表达网络有关。UTY 依赖的染色质过程与谱系决定、免疫细胞分化以及增殖细胞中转录状态的维持相互交织。UTY 剂量变化或与 Y 染色体相关的调控已在性别偏倚的分子表型及疾病相关的转录失调(包括与癌症相关的表观基因组改变)背景下受到研究。
UTY CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性UTY的表达。
UTY CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的UTY基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于UTY转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性UTY表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的UTY位点,并能够研究内源性位点上依赖于UTY的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在UTY表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟UTY通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。