Plasmide Double Nickase (h) Uteroglobin/SCGB1A1/CC10: sc-400381-NIC

SCGB1A1 code l'utéroglobine (également appelée CC10/CCSP), une protéine sécrétée de la famille des sécrétoglobines, produite principalement par les cellules club des voies aériennes et par d'autres épithéliums muqueux. L'utéroglobine exerce des fonctions anti-inflammatoires, immunomodulatrices et associées à l'activité antioxydante, pouvant influencer l'homéostasie de la barrière épithéliale et réguler les réponses aux agressions environnementales, notamment en modulant la signalisation des cytokines et des processus liés aux eicosanoïdes. L'expression de SCGB1A1 est largement utilisée comme marqueur de la différenciation des cellules club et de l'état de l'épithélium des voies aériennes, ce qui la relie à des voies impliquées dans la défense des muqueuses, la réparation tissulaire et la régulation de l'immunité innée. Des niveaux altérés de SCGB1A1 et le dysfonctionnement des cellules club sont étudiés dans le contexte d'affections inflammatoires des voies aériennes, des réponses à l'exposition à la fumée ou aux polluants, ainsi que des phénotypes de remodelage épithélial pertinents pour des modèles de maladies respiratoires.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SCGB1A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SCGB1A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SCGB1A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SCGB1A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.