USP51 Double Nickaseプラスミド (h): sc-414805-NIC

ヒトUSP51は、タンパク質基質からユビキチンを切断する脱ユビキチン化酵素をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質安定性、細胞内局在、シグナル伝達の持続時間の制御に寄与する。ユビキチン‐プロテアソーム制御ネットワークの一要素として、USP51は、動的なユビキチン化／脱ユビキチン化を介してDNA損傷応答、クロマチン関連プロセス、細胞周期進行を協調させる経路において研究されている。脱ユビキチン化酵素活性の撹乱はプロテオスタシスやストレス応答シグナルを組み替え得るため、USP51は、疾患関連の細胞状態におけるゲノム維持機構や転写プログラムの変容の基盤を調べるうえで重要な結節点となる。USP51の機能解析は、ユビキチン編集が経路間クロストークや、タンパク質分解回転の破綻に関連する表現型をどのように調節するかを研究するための基盤を提供する。

USP51 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における USP51 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、USP51内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、USP51の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、USP51が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。