USP30 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-407851-NIC

인간 USP30은 미토콘드리아 외막에 존재하는 탈유비퀴틴화 효소를 암호화하며, 손상된 미토콘드리아에서 유비퀴틴 의존적 신호를 상쇄합니다. PINK1/Parkin에 의해 표지된 기질에서 유비퀴틴 사슬을 제거함으로써 USP30은 미토파지 개시, 미토콘드리아 단백질 턴오버, 그리고 소기관 품질 관리를 조절합니다. 이러한 활성은 유비퀴틴–프로테아좀 및 자가포식–리소좀 경로와 교차하며, 미토콘드리아 역학과 세포 스트레스 반응에 영향을 미칩니다. USP30과 연관된 유비퀴틴화의 조절 이상은 미토콘드리아 항상성 장애가 특징인 신경퇴행성 질환 및 기타 질환과 관련된 기전에서 관여하는 것으로 시사되어 왔습니다.

USP30 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 USP30 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 USP30 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 USP30의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, USP30 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.