USP22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432127

Panoramica

Usp22 codifica l’enzima deubiquitinante USP22, una componente catalitica del complesso coattivatore trascrizionale SAGA, che rimuove l’ubiquitina dall’istone H2B e da altri substrati per influenzare l’accessibilità della cromatina e i programmi di espressione genica. Attraverso la regolazione dell’allungamento trascrizionale, della progressione del ciclo cellulare e delle risposte al danno del DNA, USP22 contribuisce a coordinare proliferazione, differenziamento e mantenimento dell’integrità del genoma. L’attività di USP22 interseca vie di controllo epigenetico e la proteostasi dipendente dall’ubiquitina, plasmando output di segnalazione specifici del contesto che risultano frequentemente alterati in stati trascrizionali rilevanti per il cancro. Firme di espressione genica associate a USP22 e deregolate sono state collegate all’aggressività tumorale e a fenotipi simil-staminali, supportandone l’utilità in studi meccanicistici sulla trascrizione oncogenica e sulla plasticità epigenetica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USP22 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Usp22 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Usp22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Usp22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USP22.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Usp22 per lo studio della segnalazione di USP22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Usp22 critici per la funzione di USP22
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Usp22 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USP22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal USP22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Usp22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USP22 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR USP22 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Usp22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Usp22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.