USP10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404281-ACT

ヒトUSP10は、標的タンパク質からユビキチン鎖を除去するユビキチン特異的プロテアーゼをコードしており、タンパク質の安定性、局在、ならびにシグナル伝達の出力を調節します。USP10は、DNA損傷応答、ストレスシグナル、タンパク質品質管理におけるユビキチン依存的制御に関与し、p53制御、オートファジー、エンドソーム輸送に関連する経路の調節も担います。プロテオスタシスとチェックポイントシグナルを形成することで、USP10は、がんや神経変性疾患でしばしば破綻する遺伝毒性ストレスおよび酸化ストレスに対する細胞応答に影響を与えます。USP10活性の変化は、ユビキチンシグナルの異常や炎症性シグナルプログラムの破綻と関連づけられており、経路のリワイヤリングを機構的に解析するための有用な結節点となります。

USP10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性USP10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

USP10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における USP10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUSP10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性USP10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUSP10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUSP10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUSP10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUSP10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。