USF-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423629

概要

上流転写因子2（USF-2）は、マウスのUsf2遺伝子にコードされる塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）・ロイシンジッパー型の転写因子であり、E-boxモチーフに結合して、代謝およびストレス応答性遺伝子ネットワークにわたるプロモーター活性を制御します。USF-2は、グルコースおよび脂質代謝、細胞周期の進行、分化プログラムの転写制御に関与し、さらに共役因子（コレギュレーター）との相互作用を介してクロマチン環境を調節することもできます。マウスの系では、USF-2活性の変化が代謝恒常性の破綻や増殖シグナルの変化と関連づけられており、心代謝およびがん関連経路の研究における重要性が示唆されています。そのためUsf2は、栄養感知、転写回路、組織特異的遺伝子発現を結びつける結節点として、しばしば研究対象となっています。

USF-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUsf2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Usf2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Usf2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、USF-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、USF-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Usf2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• USF-2の機能に不可欠なUsf2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Usf2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• USF-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUSF-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Usf2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  USF-2 HDRプラスミド（m）および USF-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUsf2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUsf2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。