UPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423623
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- UPase O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico UPase, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
UPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423623 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Upp1 de camundongo codifica a uridina fosforilase (UPase), uma enzima-chave da via de salvamento de pirimidinas que catalisa a fosforólise reversível da uridina em uracila e ribose-1-fosfato. Ao regular os pools celulares de nucleosídeos, a UPase influencia a disponibilidade de precursores de RNA/DNA e se integra a programas de metabolismo de nucleotídeos que sustentam a proliferação e a adaptação metabólica. A expressão de Upp1 e a atividade da UPase têm sido estudadas em contextos de remodelamento tecidual e respostas ao estresse, nos quais mudanças no turnover de nucleosídeos podem alterar a homeostase celular. Como um nó metabólico, o Upp1 é frequentemente usado para investigar ligações entre o metabolismo de pirimidinas, o equilíbrio mitocondrial e redox e o crosstalk entre vias que afeta fenótipos de crescimento e sobrevivência.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO UPase (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Upp1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Upp1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Upp1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína UPase.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Upp1 para a investigação da sinalização de UPase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Upp1 críticos para a função UPase
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Upp1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo UPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo UPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Upp1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo UPase Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR UPase (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Upp1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Upp1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.