UNC93B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404369-ACT

UNC93B1 (UNC93 homolog B1) é uma proteína de membrana do retículo endoplasmático que controla o tráfego e a competência de sinalização de receptores do tipo Toll (TLRs) que detectam ácidos nucleicos, incluindo TLR3, TLR7, TLR8 e TLR9. Ao atuar como chaperona desses receptores do RE para compartimentos endolisossomais, a UNC93B1 ajuda a definir o limiar de ativação do interferon tipo I e da via de NF-κB a jusante de ácidos nucleicos associados a patógenos e a dano. Alterações na função da UNC93B1 podem perturbar a detecção imune inata, a produção de citocinas e a ativação de células apresentadoras de antígeno, vinculando-a à desregulação imune e à suscetibilidade a fenótipos inflamatórios impulsionados por infecções. Como reguladora da compartimentalização endossomal de TLRs, a UNC93B1 é frequentemente estudada em monócitos, células dendríticas, células B e modelos epiteliais para dissecar circuitos da imunidade inata.

UNC93B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UNC93B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UNC93B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UNC93B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UNC93B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UNC93B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UNC93B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UNC93B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UNC93B1 em células tumorais com expressão de UNC93B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.