UGT1A9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417693-ACT

UGT1A9 kodiert eine humane UDP-Glucuronosyltransferase, die die Glucuronidierung vielfältiger Xenobiotika und endogener niedermolekularer Substanzen katalysiert, deren Wasserlöslichkeit erhöht und dadurch deren Eliminierung erleichtert. Als Enzym des Phase‑II‑Metabolismus trägt UGT1A9 zu hepatischen und extrahepatischen Entgiftungsnetzwerken bei, die mit CYP‑abhängiger Oxidation, Redoxhomöostase und transporter-vermittelten Dispositionswegen verknüpft sind. Unterschiede in der Expression oder Aktivität von UGT1A9 können die zelluläre Verarbeitung von Arzneistoffen und Metaboliten verschieben und damit die Anfälligkeit für metabolitengetriebene Stressantworten beeinflussen. In der Forschung dient UGT1A9 als zentraler Knotenpunkt zur Untersuchung der Glucuronidierungskapazität, der chemischen Biologie und der interindividuellen Variabilität der Biotransformation.

UGT1A9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT1A9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT1A9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT1A9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT1A9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT1A9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT1A9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT1A9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT1A9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT1A9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.