Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Ubiquitin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423574
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Ubiquitin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Ubiquitin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ubiquitin Anticorpo (A-5): sc-166553
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ubiquitin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423574 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ubb codifica a ubiquitina, um modificador de 76 aminoácidos altamente conservado, que é ligado covalentemente a proteínas-alvo para regular sua estabilidade, localização e sinalização. A ubiquitinação coordena a degradação dependente do proteassoma, a endocitose e as respostas a danos no DNA, e se conecta à autofagia por meio de adaptadores que se ligam à ubiquitina, controlando a proteostase. Em células de camundongo, a sinalização dependente de ubiquitina contribui amplamente para a progressão do ciclo celular, respostas ao estresse e regulação de vias imunes, por meio da topologia das cadeias de ubiquitina e da especificidade das ligases E3. A desregulação da homeostase de ubiquitina e do fluxo pelo proteassoma é comumente explorada como leitura mecanística em estudos de neurodegeneração, inflamação e adaptação ao estresse relevante para o câncer, tornando Ubb um nó-chave para a investigação de vias.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ubb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ubb, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ubb na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ubiquitin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ubb para a investigação da sinalização de Ubiquitin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ubb críticos para a função Ubiquitin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ubb para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Ubiquitin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Ubiquitin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ubb. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Ubiquitin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Ubiquitin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ubb para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ubb definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.