UBE2O CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410610

概要

UBE2Oは、基質タンパク質へのユビキチン転移を担うE2/E3ハイブリッド型のユビキチン結合酵素をコードしており、ユビキチン化をプロテオスタシスおよびタンパク質品質管理と結び付けています。選択的なタンパク質をユビキチン依存的分解へ導くことで、翻訳関連経路の制御、ストレス応答に伴うタンパク質複合体の再編成、ならびに細胞状態の移行に関与します。ユビキチンシグナル伝達や主要な制御因子の安定性に影響を及ぼすことから、UBE2Oは、プロテオーム恒常性の変化、代謝適応、細胞周期や分化に関連するプログラムなどの文脈で研究されています。UBE2O活性の破綻やユビキチン化動態の異常は、タンパク質分解とストレス応答の乱れを特徴とするがんをはじめとした疾患で、しばしば検討されています。

UBE2O CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUBE2O遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UBE2O内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UBE2Oのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UBE2Oタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UBE2Oシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UBE2O欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UBE2Oの機能に不可欠なUBE2Oエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UBE2Oゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UBE2O CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUBE2O CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UBE2O遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UBE2O HDRプラスミド（h）および UBE2O HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUBE2Oホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUBE2O標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。