Tyrosinase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400255-ACT

ヒトTYR遺伝子はチロシナーゼをコードしており、これは銅依存性のオキシダーゼである。チロシナーゼは、L-チロシンをL-DOPAおよびドーパキノンへと変換することでメラニン生成（メラノジェネシス）の律速段階を触媒し、最終的にメラノソーム内でのユーメラニンおよびフェオメラニン合成を駆動する。TYR活性は、メラノソームの生合成や輸送プログラムと統合され、色素細胞の転写ネットワークと協調して働くことで、細胞内のレドックスバランスやUV応答性のストレス経路にも影響を及ぼす。TYR機能の変化は色素沈着の表現型やメラニン関連疾患と関連しており、またメラノサイト分化やメラノソーム成熟の分子指標としてもしばしば利用される。系譜特異的な酵素として、チロシナーゼは色素細胞におけるオルガネラ特異的な酵素学や制御された分泌を研究するための有用なモデルにもなる。

Tyrosinase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TYRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tyrosinase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TYR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTYR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tyrosinaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTYR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTyrosinase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTYR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTyrosinase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。