Type II 5-phosphatase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421136

Visão geral

O gene Inpp5b de camundongo codifica a 5-fosfatase tipo II (INPP5B), uma 5-fosfatase de polifosfatos de inositol que hidrolisa o fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato e fosfoinositídeos relacionados, modulando a sinalização lipídica de membrana. Ao controlar os reservatórios locais de PIP2, a INPP5B influencia vias dependentes de fosfoinositídeos envolvidas em endocitose, tráfego vesicular e remodelamento do citoesqueleto de actina, com efeitos a jusante na sinalização por receptores e na dinâmica de membrana. A função da INPP5B está estreitamente alinhada ao circuito mais amplo de sinalização PI3K/PLC e intersecciona processos de tráfego associados a cílios e ao complexo de Golgi. A desregulação do turnover de fosfoinositídeos é amplamente implicada em defeitos de homeostase celular, tornando Inpp5b um alvo útil para estudos mecanísticos de fenótipos de sinalização e transporte de membrana.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Type II 5-phosphatase (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Inpp5b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Inpp5b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Inpp5b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Type II 5-phosphatase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Inpp5b para a investigação da sinalização de Type II 5-phosphatase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Inpp5b críticos para a função Type II 5-phosphatase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Inpp5b para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Type II 5-phosphatase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Type II 5-phosphatase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Inpp5b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Type II 5-phosphatase Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Type II 5-phosphatase (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Inpp5b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Inpp5b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.