TWIK-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405238-NIC

KCNK1は、2ポアドメイン型カリウム（K2P）チャネルであるTWIK-1をコードしており、背景K⁺コンダクタンスを提供することで、興奮性細胞・非興奮性細胞のいずれにおいても静止膜電位および入力抵抗の設定に寄与する。TWIK-1の活性は細胞の電気的恒常性に関与し、膜の興奮性、イオン共役輸送、ならびに細胞外pHやイオン組成の変化に対する応答に影響を及ぼす。ヒト組織では、TWIK-1は神経シグナル伝達、アストロサイトの生理、血管機能といった文脈で研究されており、カリウムチャネル活性の変化がネットワークの興奮性やバリア特性を調節し得ることが示されている。TWIK-1に関連する機構を含むK2Pチャネル機能の破綻は、神経学的および心血管疾患に関連する表現型への関与が示唆されるものとして、しばしば検討されている。

TWIK-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNK1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNK1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNK1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNK1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。