TWEAK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401202
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TWEAK O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TWEAK, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TWEAK Anticorpo (CARL-1): sc-56248
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TWEAK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401202 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
TNFSF12 codifica a citocina TWEAK (TNF-like weak inducer of apoptosis), uma proteína transmembranar do tipo II que pode ser liberada como ligante solúvel e sinaliza principalmente por meio do receptor FN14/TNFRSF12A. A interação TWEAK–FN14 modula a atividade das vias de NF-κB e MAPK para influenciar a sobrevivência, a proliferação, a migração, a diferenciação e a expressão de genes inflamatórios, com efeitos dependentes do contexto sobre a apoptose e a remodelação tecidual. Esse eixo está implicado na regulação de programas angiogênicos e fibróticos, bem como no recrutamento de células imunes e em redes de citocinas em tecidos danificados ou sob estresse. A desregulação da sinalização TWEAK/FN14 tem sido associada à fisiopatologia inflamatória e autoimune, a processos neuroinflamatórios e à remodelação do microambiente tumoral, sustentando estudos mecanísticos em imunologia e biologia do câncer.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TWEAK (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TNFSF12 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TNFSF12, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TNFSF12 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TWEAK.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TNFSF12 para a investigação da sinalização de TWEAK, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TNFSF12 críticos para a função TWEAK
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TNFSF12 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TWEAK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TWEAK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TNFSF12. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TWEAK Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TWEAK (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TNFSF12 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TNFSF12 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.