TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423540

Übersicht

Ttf1 (TTF1/Transkriptions-Terminationsfaktor 1) ist ein sequenzspezifisch DNA-bindendes Protein, das in ribosomalen DNA-(rDNA)-Repeats als Faktor für die Transkriptionsbeendigung und als Barrierefaktor für Replikationsgabeln fungiert. In Maus-Zellen hilft TTF1, die nukleoläre Chromatinorganisation zu strukturieren, koordiniert die Transkription durch RNA-Polymerase I mit der rRNA-Prozessierung und unterstützt die Genomstabilität, indem es Konflikte zwischen rDNA-Replikation und -Transkription reguliert. Über diese Funktionen trägt TTF1 zur Homöostase des Nukleolus und zur Ribosomenbiogenese bei – Prozesse, die eng mit Proliferation und zellulären Stressantworten verknüpft sind. Eine Fehlregulation der Kontrolle der rDNA-Transkription und der nukleolären Funktion ist häufig an onkogenen Wachstumsprogrammen und allgemeineren Phänotypen der Genominstabilität beteiligt, wodurch Ttf1 ein relevanter Zielfaktor für mechanistische Studien ist.

Das TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ttf1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ttf1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ttf1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ttf1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ttf1-Exone abzielen, die für die TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ttf1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ttf1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 HDR-Plasmid (m) und TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ttf1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ttf1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.