TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423540

概要

Ttf1（TTF1／Transcription Termination Factor 1：転写終結因子1）は、配列特異的にDNAへ結合するタンパク質で、リボソームDNA（rDNA）リピートにおいて転写終結因子および複製フォーク障壁因子として機能します。マウス細胞では、TTF1は核小体クロマチンの編成に関与し、RNAポリメラーゼIによる転写とrRNAプロセシングを協調させるとともに、rDNAにおける複製と転写の衝突を制御することでゲノム安定性を支えます。これらの役割を通じて、TTF1は核小体の恒常性とリボソーム生合成に寄与しており、これらの過程は増殖や細胞ストレス応答と密接に結び付いています。rDNA転写制御および核小体機能の破綻は、がん化を促す増殖プログラムや、より広範なゲノム不安定性の表現型にしばしば関与するため、Ttf1は機構解明研究において重要な標的となります。

TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTtf1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ttf1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ttf1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TTF/Transcription Termination Factor/TTF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TTF/Transcription Termination Factor/TTF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ttf1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TTF/Transcription Termination Factor/TTF1の機能に不可欠なTtf1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ttf1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ttf1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 HDRプラスミド（m）および TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTtf1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTtf1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。