TSG-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423437

概要

Tnfaip6は、腫瘍壊死因子α（TNF‑α）誘導タンパク質6（TSG‑6）をコードしており、TSG‑6は炎症や組織損傷時に細胞外マトリックスを再構築する、分泌型のヒアルロン酸結合タンパク質です。TSG‑6は、インターαインヒビターからヒアルロン酸（HA）へのヘビーチェーンの転移を触媒し、白血球の接着、細胞移動、炎症反応の収束に影響する、安定したHAリッチなマトリックスの形成を促進します。マウスの系では、TNFAIP6はTNF/NF‑κBなどの炎症促進シグナルの下流で迅速に誘導され、ケモカイン活性、プロテアーゼネットワーク、マトリックス構造を調節します。TSG‑6/HAの生物学的機能の破綻は、関節炎、肺および腸管の炎症、創傷修復、線維化のモデルと関連づけられており、サイトカインシグナル伝達とECM動態を結びつける機構上の結節点としての有用性が示唆されています。

TSG-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnfaip6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnfaip6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnfaip6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TSG-6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TSG-6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnfaip6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TSG-6の機能に不可欠なTnfaip6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnfaip6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TSG-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTSG-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnfaip6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TSG-6 HDRプラスミド（m）および TSG-6 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnfaip6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnfaip6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。