TRPV5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431458

概要

Trpv5は、上皮細胞の頂端膜に存在するCa²⁺流入チャネルとして機能する、一過性受容体電位（TRP）バニロイドファミリーの中でも特にカルシウム選択性の高いメンバーであるTRPV5をコードします。マウス腎臓の遠位曲尿細管および接続尿細管では、TRPV5が経細胞性カルシウム再吸収を担い、カルビンジンによる緩衝機構や、基底外側膜におけるNCX1およびPMCAを介した細胞外への排出と連携することで、全身のカルシウム恒常性の形成に寄与します。チャネル活性は、細胞内Ca²⁺によるフィードバック、ホスホイノシチドシグナル、pH、ならびにビタミンDやPTH（副甲状腺ホルモン）を含むホルモン性調節因子によって制御され、TRPV5をCa²⁺依存性シグナル伝達および上皮輸送プログラムと結び付けています。TRPV5依存性輸送の調節異常は、高カルシウム尿症、腎結石感受性、ならびにマウスモデルにおけるミネラル代謝表現型の研究と関連します。

TRPV5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrpv5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trpv5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trpv5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRPV5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRPV5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trpv5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRPV5の機能に不可欠なTrpv5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trpv5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRPV5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRPV5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trpv5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRPV5 HDRプラスミド（m）および TRPV5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrpv5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrpv5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。