Troponin T-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400949-ACT

TNNT2 codifica a troponina T cardíaca, um componente central do complexo de troponina que ancora as subunidades regulatórias ao filamento fino e converte sinais de Ca²⁺ em interações coordenadas entre actina e miosina. Ao modular o posicionamento da tropomiosina sobre a F-actina, a TNNT2 ajuda a definir a cinética e a sensibilidade da contração e do relaxamento do sarcómero, integrando-se ao acoplamento excitação–contração e às vias de manuseio do cálcio. Alterações na expressão ou na função de TNNT2 perturbam a organização miofibrilar e o desempenho contrátil, e a TNNT2 está amplamente implicada em fenótipos associados a cardiomiopatias hereditárias e adquiridas. Como marcador da linhagem cardíaca e nó funcional na sinalização sarcomérica, a TNNT2 é frequentemente utilizada para estudar a maturação dos miócitos, as respostas ao stress e programas transcricionais relacionados com a contratilidade.

Troponin T-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNNT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Troponin T-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNNT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNNT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Troponin T-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNNT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Troponin T-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Troponin T-C em células tumorais com expressão de TNNT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.