trichoplein CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407983

概要

TCHPはトリコプレイン（trichoplein）をコードする遺伝子であり、中心小体および微小管に関連するタンパク質として、中心体機能と一次繊毛の動態を調節し、細胞周期の進行と繊毛シグナル伝達を結び付けています。トリコプレインは、細胞周期キナーゼや中心体制御因子との相互作用を介して繊毛形成（ciliogenesis）の制御に関与するとされ、細胞骨格の構成や有糸分裂の正確性にも影響を与えます。繊毛依存性経路や中心体の完全性に対する作用を通じて、TCHP活性の変化は増殖・分化・ストレス応答を乱す可能性があります。繊毛／中心体ホメオスタシスの破綻は発生異常やがん関連表現型の機序研究と関連が深く、TCHPは経路解析のための有用なノードとなります。

trichoplein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTCHP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TCHP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TCHPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、trichopleinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、trichopleinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TCHP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• trichopleinの機能に不可欠なTCHPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TCHPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• trichoplein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびtrichoplein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TCHP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  trichoplein HDRプラスミド（h）および trichoplein HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTCHPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTCHP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。