Triadin 더블 틈내기효소 플라스미드 (m): sc-429407-NIC

Trdn은 트리아딘(triadin)을 암호화하는 유전자로, 트리아딘은 근절(sarcomere) 근육에서 흥분–수축 연계(excitation–contraction coupling)를 조직화하는 접합부(junctional) 근형질세망(sarcoplasmic reticulum) 막 단백질입니다. 트리아딘은 라이아노딘 수용체(ryanodine receptor) 복합체를 칼세퀘스트린(calsequestrin)과 같은 내강(luminal) Ca²⁺ 결합 단백질과 연결함으로써 이 과정을 조율합니다. 생쥐 심근세포와 골격근 근섬유에서 트리아딘은 세포내 Ca²⁺ 방출 및 재흡수의 동역학을 미세하게 조정하여 수축력, 불응기, 그리고 Ca²⁺ 항상성 신호전달의 양상을 형성하는 데 기여합니다. 또한 근형질세망 미세구역(microdomain) 구조에 관여함으로써 근육 발달, 스트레스 반응, 전기생리학적 안정성을 조절하는 Ca²⁺ 의존 경로에 영향을 미칩니다. TRDN 기능의 장애는 유전성 부정맥 표현형 및 근병증적 특징과 연관되어 있어, Trdn은 Ca²⁺ 처리(handling) 결함과 근형질세망 리모델링을 모델링하기 위한 관련 표적으로 여겨집니다.

Triadin 더블 니카제 플라스미드(m)는 mouse 세포주 내 Trdn 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 Trdn 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 Trdn의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, Trdn 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.