TRH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423505

概要

Trhは甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（TRH）をコードしており、TRHは視床下部でプレプロホルモンとして合成された後、生理活性をもつTRHへとプロセシングされます。活性化されたTRHはTRH受容体を介してシグナルを伝達し、視床下部―下垂体―甲状腺（HPT）系の調節に関与します。TRHは下垂体からの甲状腺刺激ホルモン分泌の神経内分泌的制御を統合するとともに、エネルギーバランス、体温調節、神経行動回路など、より広範な恒常性維持過程にも影響を及ぼします。中枢神経系（CNS）では、TRH作動性ニューロンが神経伝達物質系やストレス応答性経路と連関し、ペプチドシグナルを神経興奮性や内分泌フィードバックと結び付けています。TRHシグナルの制御不全は、甲状腺ホルモン恒常性の変化や、代謝・神経内分泌疾患に関連する表現型と関連づけられており、Trhはマウスモデルにおける機序解明研究の有用な標的となっています。

TRH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrh遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trh内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trhのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trh欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRHの機能に不可欠なTrhエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trhゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trh遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRH HDRプラスミド（m）および TRH HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrhホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrh標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。