Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRF2 (m): sc-423340

Présentation

Le gène murin **Terf2** code le facteur de liaison aux répétitions télomériques 2 (**TRF2**), un composant central du complexe **shelterin** qui se fixe à l’ADN télomérique double brin et favorise la formation de **t-loops** afin de protéger les extrémités des chromosomes. TRF2 supprime l’activation inappropriée de la réponse aux dommages de l’ADN dépendante d’**ATM** et limite les fusions chromosome à chromosome en empêchant la jonction d’extrémités non homologues (**NHEJ**) aux télomères, contribuant ainsi à la stabilité du génome et au bon déroulement du cycle cellulaire. La perturbation de la fonction de TRF2 entraîne le décapsulage des télomères, du stress réplicatif et des aberrations chromosomiques, des processus pertinents pour la biologie du vieillissement, l’épuisement des cellules souches et la recherche sur la tumorigenèse. **Terf2** est donc largement utilisé comme outil pour étudier les voies de maintenance des télomères et les interactions entre télomères, réparation de l’ADN et signalisation des points de contrôle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRF2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Terf2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Terf2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Terf2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRF2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Terf2 pour l'étude de la signalisation de TRF2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Terf2 essentiels à la fonction de TRF2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Terf2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRF2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRF2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Terf2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRF2 plasmide HDR (m) et le TRF2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Terf2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Terf2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.