Plasmide CRISPR/Cas9 KO TREX-1 (m): sc-423502

Présentation

Trex1 code TREX-1, une exonuclease d’ADN 3′→5′ qui dégrade l’ADN cytosolique aberrant issu de rétroéléments endogènes, du stress réplicatif ou de dommages à l’ADN, limitant ainsi l’activation inappropriée des capteurs de l’immunité innée. En freinant la signalisation cGAS–STING et les programmes transcriptionnels en aval de l’interféron de type I, TREX-1 contribue au maintien de l’homéostasie immunitaire et prévient les réponses inflammatoires chroniques dirigées contre les acides nucléiques du soi. Dans les modèles murins, la perte de Trex1 est couramment utilisée pour modéliser l’autoinflammation induite par les acides nucléiques et pour explorer les mécanismes reliant l’instabilité génomique, les voies de mort cellulaire et l’expression des gènes stimulés par l’interféron. L’activité de TREX-1 s’articule également avec des processus de réparation de l’ADN et liés à la réplication, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du stress génotoxique et de la surveillance immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TREX-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trex1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trex1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trex1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TREX-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trex1 pour l'étude de la signalisation de TREX-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trex1 essentiels à la fonction de TREX-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trex1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TREX-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TREX-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trex1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TREX-1 plasmide HDR (m) et le TREX-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trex1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trex1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.