Transaldolase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402807-ACT

ヒトTALDO1はトランスアルドラーゼをコードしており、解糖系中間体との間で糖リン酸を相互変換することで、リボース-5-リン酸の産生量と解糖系中間体のバランスを調整する、ペントースリン酸経路の非酸化的分岐における主要酵素です。この役割を通じて、TALDO1はヌクレオチド生合成を支えるほか、経路フラックスを介して間接的にレドックス恒常性を維持し、酸化ストレスや代謝ストレスに対する細胞の適応にも寄与します。トランスアルドラーゼ活性の変化は、先天性代謝異常と関連づけられているほか、肝細胞機能、免疫制御、酸化損傷関連経路におけるより広範な異常とも関係することが示されています。代謝の結節点として、TALDO1は、ペントースリン酸経路の再配線が増殖、分化、ストレス応答に影響する状況で、しばしば研究対象となります。

Transaldolase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TALDO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Transaldolase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TALDO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTALDO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Transaldolaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTALDO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTransaldolase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTALDO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTransaldolase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。