TRAIL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418124-ACT

O TNFSF10 humano codifica o TRAIL (ligante indutor de apoptose relacionado ao TNF), uma proteína de membrana do tipo II que pode ser libertada como uma citocina solúvel e ligar-se a recetores de morte para iniciar a via extrínseca da apoptose. A sinalização do TRAIL ativa a caspase-8 e, a jusante, caspases efetoras, ao mesmo tempo que interseta com as vias de NF-κB, JNK e de amplificação mitocondrial para moldar decisões de destino celular. A atividade de TNFSF10/TRAIL influencia a vigilância imunitária, o crosstalk inflamatório e a regulação da homeostase tecidular, estando a sua desregulação associada a alterações na sensibilidade à apoptose e nas interações tumor–sistema imunitário. Enquanto nó de via, o TRAIL é frequentemente estudado em contextos de programas de morte de células cancerígenas, mecanismos de resistência e citotoxicidade mediada pelo sistema imunitário.

TRAIL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFSF10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAIL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFSF10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFSF10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAIL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFSF10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAIL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAIL em células tumorais com expressão de TNFSF10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.