Plásmido CRISPR de Activación (h) TRAF6: sc-400117-ACT

TRAF6 (factor asociado al receptor de TNF 6) es una ligasa E3 de ubiquitina de tipo RING y una proteína adaptadora que transmite señales desde miembros de la superfamilia de receptores de TNF y de los receptores tipo Toll/IL‑1. Mediante la poliubiquitinación con enlaces K63 de sí misma y de proteínas asociadas, TRAF6 favorece la activación de TAK1 y de las vías posteriores NF‑κB y MAPK, modulando la expresión génica inflamatoria, las respuestas inmunitarias innatas y los programas de supervivencia celular. TRAF6 también se integra con la señalización PI3K–AKT y contribuye a la diferenciación de osteoclastos a través de la señalización RANK–RANKL, conectando la regulación inmunitaria con la remodelación ósea. La desregulación de la señalización de TRAF6 se ha asociado con inflamación crónica, disfunción inmunitaria y activación de vías oncogénicas en múltiples contextos tumorales, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios centrados en vías de señalización.

TRAF6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRAF6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRAF6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRAF6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRAF6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRAF6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRAF6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRAF6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRAF6 en células tumorales con expresión de TRAF6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.