TorsinA Double Nickaseプラスミド (h): sc-404651-NIC

TOR1AはTorsinAをコードしており、TorsinAは小胞体および核周囲腔に局在するAAA+ ATPアーゼで、核膜の完全性とエンドメンブレン（細胞内膜系）の恒常性維持を担います。TorsinAは、核膜孔複合体の生合成、膜リモデリング、小胞体ストレスに関連するタンパク質品質管理経路の制御などの過程に関与します。TOR1Aに関連する機能が障害されると、核—細胞骨格カップリングや細胞内輸送が乱れ得るため、プロテオスタシスおよび核膜関連の細胞表現型を研究する上で重要な結節点となります。TOR1Aの変異は若年発症ジストニアと強く関連し、その関連神経生物学の理解にもつながることから、神経系／非神経系モデルにおける機構研究の分子レベルの足がかりを提供します。

TorsinA ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TOR1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TOR1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TOR1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TOR1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。