Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Topo IIIβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423472
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Topo IIIβ El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Topo IIIβ, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Topo IIIβ-1 Anticuerpo (B-10): sc-137238
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Topo IIIβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423472 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Top3b codifica la ADN topoisomerasa III beta (Topo IIIβ), una topoisomerasa de tipo IA que resuelve el estrés topológico y los intermediarios de recombinación durante el mantenimiento del genoma. En células de ratón, se ha implicado a Topo IIIβ en la preservación de la integridad de los ácidos nucleicos mediante funciones en la reparación del ADN, las respuestas al estrés asociado a la replicación y la regulación del metabolismo del ARN, en consonancia con su capacidad para actuar tanto sobre sustratos de ADN como de ARN. Estas actividades se entrecruzan con vías que controlan los conflictos entre transcripción y replicación y la estabilidad del genoma impulsada por recombinación, procesos que influyen en la homeostasis celular. La alteración del procesamiento de ácidos nucleicos dependiente de Top3b se ha asociado con fenotipos de inestabilidad genómica y es relevante para estudios de mecanismos de neurodesarrollo y relacionados con el cáncer en sistemas modelo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Topo IIIβ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Top3b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Top3b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Top3b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Topo IIIβ.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Top3b para la investigación de la señalización de Topo IIIβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Top3b críticos para la función de Topo IIIβ
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Top3b para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Top3b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Topo IIIβ (m) y el plásmido HDR Topo IIIβ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Top3b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Top3b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.