Topo IIIα CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-404439

개요

TOP3A는 인간 DNA 토포이소머레이스 IIIα를 암호화하며, 이는 DNA 복제, 재조합, 수선 과정에서 발생하는 단일가닥 DNA의 위상학적 중간체를 해소하는 IA형 토포이소머레이스이다. Topo IIIα는 BLM, RMI1, RMI2와 함께 BTRR 복합체에서 작동하여 이중 홀리데이 접합(double Holliday junction)을 용해(dissolution)하고, 비정상적인 교차(crossover) 사건을 억제하며, 상동 재조합 동안 유전체 안정성을 유지한다. 또한 소기관 특이적 복제 및 수선 인자들과의 협력을 통해 미토콘드리아 DNA 유지에도 기여하여, TOP3A를 핵 및 미토콘드리아 유전체 무결성과 연결한다. TOP3A 관련 경로의 교란은 유전체 불안정성 표현형과 관련이 있으며, DNA 수선 결함 및 복제 스트레스 감수성을 특징으로 하는 유전 질환과도 연관되어 왔다.

Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 TOP3A 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 TOP3A 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 TOP3A의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Topo IIIα 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Topo IIIα 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 TOP3A 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Topo IIIα 기능에 중요한 TOP3A 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 TOP3A 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 TOP3A 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Topo IIIα HDR 플라스미드 (h) 및 Topo IIIα HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 TOP3A 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 TOP3A 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.