TNF-R1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400206-ACT

TNFRSF1A codifica o TNF-R1, um receptor de TNF expresso de forma ubíqua que inicia a sinalização em resposta ao TNF para regular a inflamação, a sobrevivência celular e a morte celular. A ligação do ligante promove a montagem de complexos associados ao receptor que modulam as vias de NF-κB e MAPK para respostas transcricionais e também pode direcionar a sinalização para a ativação de caspases e para necrose regulada, dependendo do contexto celular. Por meio desses mecanismos, o TNF-R1 molda redes de citocinas, o recrutamento de leucócitos e a homeostase tecidual. A desregulação da sinalização de TNFRSF1A/TNF-R1 tem sido implicada em fenótipos autoinflamatórios e em uma biologia mais ampla de doenças inflamatórias, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de sinalização imune e respostas ao estresse.

TNF-R1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TNF-R1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TNF-R1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TNF-R1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TNF-R1 em células tumorais com expressão de TNFRSF1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.