TNFβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421477

概要

Ltaは腫瘍壊死因子β（TNFβ、別名リンフォトキシンα）をコードしており、主に活性化リンパ球によって産生されるTNFスーパーファミリーのサイトカインです。TNFR1/TNFR2を介してシグナルを伝達し、リンパ組織の形成や炎症性クロストークに寄与します。TNFβはカノニカルNF-κBおよびMAPKシグナル伝達を活性化し、白血球の生存、サイトカインネットワーク、接着分子の発現を制御することで、免疫細胞のトラフィッキングや組織リモデリングを形作ります。マウスの系では、Ltaの機能は二次リンパ組織の構築と、獲得免疫応答の協調に密接に関連しています。TNFβシグナルの異常は、慢性炎症、自己免疫、腫瘍関連免疫微小環境（ストローマ—免疫相互作用が変化する状況）のモデルで、しばしば検討されています。

TNFβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLta遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lta内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ltaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TNFβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TNFβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lta欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TNFβの機能に不可欠なLtaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ltaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TNFβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTNFβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lta遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TNFβ HDRプラスミド（m）および TNFβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLtaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLta標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。