Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
TNAP Antibody (3H415): sc-73524. Western blot analysis of TNAP expression in Saos-2 whole cell lysate (A) and human adrenal gland tissue extract (B).
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TNAP双切口酶质粒(h): sc-400784-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- TNAP 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- TNAP双切酶质粒（h）和TNAP双切酶质粒（h2）编码针对ALPL的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：TNAP: sc-21708，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
TNAP双切口酶质粒(h) | sc-400784-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TNAP双切口酶质粒(h2) | sc-400784-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALPL 编码组织非特异性碱性磷酸酶（TNAP），这是一种通过糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定于细胞表面的外酶，可水解细胞外磷酸单酯，从而调控无机磷与焦磷酸盐之间的平衡。TNAP 通过降解焦磷酸盐来调节矿化过程，支持骨与牙齿基质的正常成熟；同时，它还可在细胞外环境中通过去磷酸化核苷酸而影响嘌呤能信号传导。ALPL/TNAP 的活性与控制磷酸盐稳态及细胞外基质钙化的通路相交织，其功能异常与低碱性磷酸酶症以及病理性钙化表型相关。作为一种暴露于细胞表面且催化活性可测的酶，TNAP 为研究矿物质代谢与细胞分化模型中“基因型到表型”的关系提供了一个便于操作的切入点。
TNAP 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 ALPL 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ALPL内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏ALPL的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了ALPL基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。