TMEM191B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417493-ACT

TMEM191B codifica uma proteína transmembrana prevista, com múltiplas passagens, e com anotação funcional limitada em células humanas, sugerindo papéis ligados à organização de membranas e à sinalização específica de compartimentos. Estudos transcriptómicos implicam a TMEM191B em programas de regulação do estado celular que se cruzam com vias de tráfego intracelular, proteostase e resposta ao stress, nas quais proteínas de membrana frequentemente modulam a disponibilidade de recetores e a propagação de sinais. Padrões de expressão alterados foram observados em conjuntos de dados relevantes para determinadas doenças, sustentando a investigação da TMEM191B como um regulador dependente do contexto, em vez de um gene amplamente essencial. A sobre-expressão experimental pode ajudar a definir respostas transcricionais a jusante, parceiros de interação e conectividade de vias em sistemas modelo imunitários, epiteliais ou de cancro.

TMEM191B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM191B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM191B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM191B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM191B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM191B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM191B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM191B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM191B em células tumorais com expressão de TMEM191B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.