TMEM173 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-428364-ACT

O gene Tmem173 de camundongo codifica a TMEM173 (STING), um adaptador residente do retículo endoplasmático que detecta indiretamente DNA citosólico por meio de cGAMP produzido pela cGAS e coordena a sinalização imune inata. Após a ativação, a TMEM173 trafega para compartimentos perinucleares e aciona as vias TBK1–IRF3 e NF-κB para induzir interferons do tipo I, citocinas inflamatórias e programas antivirais de restrição. Esse eixo modula a apresentação de antígenos, respostas ligadas à autofagia e a comunicação com vias de morte celular, tornando o Tmem173 um nó central na inflamação desencadeada por ácidos nucleicos. A sinalização desregulada de STING tem sido associada a fenótipos inflamatórios impulsionados por interferon e contribui para o contexto imune tumoral, ressaltando seu valor em modelos de infecção, autoimunidade e imunobiologia do câncer.

TMEM173 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tmem173 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM173 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tmem173 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tmem173, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM173. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tmem173 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM173 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM173 em células tumorais com expressão de Tmem173 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.