Plasmide CRISPR d'Activation (m) TMEM173: sc-428364-ACT

Le gène murin *Tmem173* code TMEM173 (STING), un adaptateur résidant dans le réticulum endoplasmique qui détecte indirectement l’ADN cytosolique via le cGAMP produit par cGAS et coordonne la signalisation de l’immunité innée. Lors de son activation, TMEM173 se relocalise vers des compartiments périnucléaires et active les voies TBK1–IRF3 et NF-κB, induisant des interférons de type I, des cytokines inflammatoires et des programmes de restriction antivirale. Cet axe module la présentation de l’antigène, des réponses liées à l’autophagie et la communication avec les voies de mort cellulaire, faisant de *Tmem173* un nœud central de l’inflammation déclenchée par les acides nucléiques. Une signalisation STING dérégulée a été associée à des phénotypes inflammatoires dépendants des interférons et contribue au contexte immunitaire tumoral, soulignant son intérêt dans des modèles d’infection, d’auto-immunité et d’immunobiologie du cancer.

TMEM173 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tmem173 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM173 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tmem173 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tmem173, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM173. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tmem173 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM173 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM173 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tmem173 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.