TMEM173 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403148-ACT

TMEM173は、cGASによって産生される環状ジヌクレオチドを介して細胞質DNAを感知し、自然免疫シグナル伝達を開始する小胞体常在性アダプターであるSTINGをコードしている。活性化されると、STINGはゴルジ体へ移行し、TBK1およびIKK依存的にIRF3とNF-κBのリン酸化を促進して、I型インターフェロンおよび炎症性サイトカインの転写プログラムを駆動する。この経路はDNA損傷応答、抗微生物防御、免疫原性細胞死を統合しており、異常な炎症を防ぐために厳密に制御されている。STING活性の制御破綻は、自己炎症性の表現型、インターフェロン異常症、腫瘍—免疫相互作用の変化と関連づけられており、TMEM173は免疫学およびがん生物学研究における重要な結節点となっている。

TMEM173 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM173の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM173 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM173 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM173転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM173の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM173遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM173依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM173発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM173経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。