TLE3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400386

概要

TLE3（transducin-like enhancer of split 3）は、Groucho/TLEファミリーに属する転写コリプレッサーをコードしており、TCF/LEFやHES/HEYをはじめとする、DNAに結合した因子や各種の系譜制御因子と相互作用して、発生過程および組織恒常性の維持における遺伝子発現プログラムを調節します。クロマチン修飾複合体をリクルートすることで、TLE3はWnt/β-カテニン依存性の転写、Notch経路のエフェクター出力、ならびに分化に関連するその他の経路に影響を及ぼします。TLE3活性の変化は、がん生物学や代謝表現型を含む複数の疾患文脈において観察される、細胞運命決定の破綻、増殖制御異常、転写リプログラミングと関連づけられています。これらの特性により、TLE3は経路間クロストークや、状況依存的な転写を制御するエピジェネティック機構を解明するための有用な標的となります。

TLE3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTLE3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TLE3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TLE3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TLE3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TLE3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TLE3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TLE3の機能に不可欠なTLE3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TLE3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TLE3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTLE3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TLE3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TLE3 HDRプラスミド（h）および TLE3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTLE3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTLE3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。