TIMP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402560

概要

TIMP4は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）に結合してその活性を抑制し、細胞外マトリックス（ECM）のターンオーバーを調節する分泌型の内因性阻害因子である組織型メタロプロテイナーゼ阻害因子4（TIMP-4）をコードします。細胞周囲のプロテオリシスを調整することで、TIMP-4は細胞接着や遊走、組織リモデリングといったプログラムに影響を与え、ECM–インテグリンシグナル、炎症性シグナル、増殖因子の利用可能性などと連動します。TIMP4の発現変化やTIMP/MMPバランスの破綻は、ECM組成とプロテアーゼ活性が細胞表現型を規定する線維化、血管リモデリング、腫瘍微小環境のダイナミクスといった文脈でしばしば研究されています。TIMP-4はまた、生理活性分子のプロテアーゼ依存的なプロセシングの制御にも関与するため、マトリックス生物学およびプロテオスタシスにおける経路マッピングの観点からも重要です。

TIMP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTIMP4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TIMP4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TIMP4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TIMP-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TIMP-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TIMP4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TIMP-4の機能に不可欠なTIMP4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TIMP4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TIMP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTIMP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TIMP4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TIMP-4 HDRプラスミド（h）および TIMP-4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTIMP4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTIMP4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。