TIGAR CRISPR Activationプラスミド (m): sc-435668-ACT

マウスのTigarは、TIGAR（TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator：p53誘導性の解糖・アポトーシス調節因子）をコードしており、フルクトース-2,6-ビスリン酸を低下させることで、細胞内の炭素フラックスを解糖系からペントースリン酸経路へと切り替える、フルクトース-2,6-ビスホスファターゼ様酵素である。NADPH産生の増加と活性酸素種（ROS）の低下を介して、TIGARはレドックス恒常性を維持し、ミトコンドリア機能に影響を与えるとともに、代謝ストレスや遺伝毒性ストレスに応答してアポトーシスおよびオートファジーを調節する。TIGARの活性は、p53依存的なストレスシグナル伝達、解糖系の制御、抗酸化防御と交差しており、代謝リモデリング、炎症性ストレス応答、ならびに疾患関連の細胞表現型における酸化障害の研究において重要である。マウスモデルでは、TIGAR発現を攪乱することで、グルコース代謝とROS緩衝能が細胞の生存、増殖、組織適応をどのように規定するかを検証するために用いられている。

TIGAR CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tigarの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TIGAR CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tigar 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTigar転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TIGARの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTigar遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTIGAR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTigar発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTIGAR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。