TIEG2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407645-ACT

KLF11 codifica per il fattore di trascrizione TIEG2 (TGF-β–inducible early gene 2), una proteina a dita di zinco di tipo Krüppel-like che modula programmi di espressione genica coinvolti nel controllo della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e dell’apoptosi. TIEG2 integra segnali provenienti dalle vie TGF-β/SMAD e coopera con regolatori della cromatina e della trascrizione per influenzare l’attività dei promotori di geni legati alla crescita e al metabolismo. Un’alterata attività di KLF11/TIEG2 è stata associata a una disregolazione dell’omeostasi endocrina e metabolica ed è stata studiata in contesti quali la suscettibilità al diabete e il rimodellamento trascrizionale associato al cancro. Queste caratteristiche rendono KLF11 un nodo utile per analizzare i meccanismi che collegano segnalazione e trascrizione e le reti regolatorie sensibili allo stress in modelli cellulari umani.

TIEG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KLF11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TIEG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KLF11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KLF11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TIEG2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KLF11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TIEG2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TIEG2 nelle cellule tumorali con espressione di KLF11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.