Plasmide CRISPR/Cas9 KO TIEG1 (h): sc-402480

Présentation

KLF10 code TIEG1 (TGF-β inducible early growth response protein 1), un facteur de transcription à doigts de zinc de type Krüppel qui intègre la signalisation TGF-β/SMAD avec un contrôle dépendant du contexte de la progression du cycle cellulaire, de la différenciation et de l’apoptose. TIEG1 régule des programmes transcriptionnels impliqués dans le remodelage de la matrice extracellulaire et l’engagement de lignée, et peut moduler les interactions avec les voies de signalisation MAPK et hormonales dans des contextes épithéliaux, osseux et immunitaires. Une activité altérée de KLF10/TIEG1 a été associée à des réponses fibreuses dérégulées, à une fonction ostéoblastique anormale et au remodelage osseux, ainsi qu’à des modifications de réseaux transcriptionnels suppresseurs de tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle de la prolifération et de l’homéostasie tissulaire. Son rôle de facteur de réponse précoce en fait un nœud utile pour disséquer la régulation génique dépendante des stimuli et l’organisation des voies en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TIEG1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLF10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLF10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLF10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TIEG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLF10 pour l'étude de la signalisation de TIEG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLF10 essentiels à la fonction de TIEG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLF10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TIEG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TIEG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLF10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TIEG1 plasmide HDR (h) et le TIEG1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLF10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLF10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.