TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400144-ACT

TGFBR2 codifica o receptor tipo II do fator de crescimento transformador beta (TGF-β), uma quinase transmembranar de serina/treonina que inicia a sinalização canônica via SMAD2/3 após a ligação do ligante e a formação do complexo receptor com receptores do tipo I. Por meio dessas vias, o TGFBR2 regula o controle do ciclo celular, a diferenciação, a apoptose, a modulação imune e a remodelação da matriz extracelular, e também interage com sinalizações não canônicas, como MAPK, PI3K/AKT e GTPases da família Rho. A sinalização TGF-β/TGFBR2 desregulada está implicada em fibrose, vigilância imune alterada, transição epitelial–mesenquimal e na biologia do microambiente tumoral, enquanto variantes com perda de função estão associadas à homeostase tecidual aberrante e ao redirecionamento de vias de sinalização ligadas ao câncer. Como consequência, o TGFBR2 atua como um nó-chave para estudar a dependência do contexto entre inibição de crescimento e programas transcricionais pró-migratórios e pró-fibróticos.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGFBR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGFBR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGFBR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGF beta Receptor 2/TGFBR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGFBR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGF beta Receptor 2/TGFBR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGF beta Receptor 2/TGFBR2 em células tumorais com expressão de TGFBR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.