TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400153-LAC

O TGFBR1 codifica o recetor 1 do fator de crescimento transformador beta (TGF-βRI/ALK5), uma quinase de serina/treonina que converte ligandos de TGF-β em programas de sinalização intracelular que controlam a proliferação, a diferenciação, a remodelação da matriz extracelular e a modulação imunitária. Após a ligação do ligando ao TGFBR2, o TGFBR1 é ativado para fosforilar SMAD2/3 e coordenar a transcrição canónica dependente de SMAD4, ao mesmo tempo que também aciona vias não canónicas como MAPK, PI3K/AKT e sinalização por GTPases do tipo Rho. Estas vias regulam a transição epitélio–mesênquima, a ativação de fibroblastos e os checkpoints do ciclo celular, tornando o TGFBR1 um nó central na homeostase tecidular. A sinalização desregulada do TGFBR1 está implicada na fibrose e em diversos cancros, e também está associada a doenças hereditárias do tecido conjuntivo e vasculares através de alterações no controlo da via de TGF-β.

As Partículas de Ativação Lentivirais TGF beta Receptor 1/TGFBR1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TGFBR1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TGF beta Receptor 1/TGFBR1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TGFBR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TGF beta Receptor 1/TGFBR1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TGFBR1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.