TGFβ3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400768-ACT

TGFB3 codifica o fator de crescimento transformador beta 3 (TGFβ3), uma citocina secretada da superfamília TGF-β que sinaliza principalmente através de TGFBR1/2 para ativar SMAD2/3 e modular programas transcricionais que controlam a proliferação, a diferenciação, a remodelação da matriz extracelular e a regulação imunitária. O TGFβ3 também interage com vias não canónicas, incluindo MAPK, PI3K/AKT e sinalização por GTPases do tipo Rho, influenciando a transição epitélio–mesênquima, a reparação de feridas e a homeostase tecidular. A desregulação da sinalização TGFB3/TGF-β está implicada na remodelação associada à fibrose, em padrões de desenvolvimento aberrantes e na dinâmica do microambiente tumoral, onde a sinalização alterada pode moldar respostas estromais e a supressão imunitária. Estas funções fazem do TGFB3 um nó-chave para estudar a regulação dependente do contexto do destino celular e da biologia da matriz em sistemas humanos.

TGFβ3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGFB3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGFβ3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGFB3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGFB3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGFβ3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGFB3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGFβ3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGFβ3 em células tumorais com expressão de TGFB3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.